ES-2細(xì)胞 人卵巢透明細(xì)胞癌   微載體培養(yǎng)原理與操作

1.原理：其原理是將對(duì)細(xì)胞無害的顆粒-微載體加入到培養(yǎng)容器的培養(yǎng)液中，作為載體，使細(xì)
胞在微載體表面附著生長，同時(shí)通過持續(xù)攪動(dòng)使微載體始終保持懸浮狀態(tài)。
貼壁依賴性細(xì)胞在微載體表面上的增殖，要經(jīng)歷黏附貼壁、生長和擴(kuò)展成單層三個(gè)階段。
細(xì)胞只有貼附在固體基質(zhì)表面才能增殖，故細(xì)胞在微載體表面的貼附是進(jìn)一步鋪展和生長的
關(guān)鍵。黏附主要是靠靜電引力和范德華力。細(xì)胞能否在微載體表面黏附，主要取決于細(xì)胞與
微載體的接觸概率和相融性。
2. 攪拌轉(zhuǎn)速：由于動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，對(duì)剪切力敏感，ES-2細(xì)胞 人卵巢透明細(xì)胞癌  因而無法靠提高攪拌轉(zhuǎn)速來增加接觸
概率。通常的操作方式是：在貼壁期采用低攪拌轉(zhuǎn)速，時(shí)攪時(shí)停；數(shù)小時(shí)后，待細(xì)胞附著于
微載體表面時(shí)，維持設(shè)定的低轉(zhuǎn)速，進(jìn)入培養(yǎng)階段。微載體培養(yǎng)的攪拌非常慢，zui大速度
75r/min。
3.細(xì)胞與微載體的相融性，ES-2細(xì)胞 人卵巢透明細(xì)胞癌 是與微載體表面理化性質(zhì)有關(guān)。一般細(xì)胞在進(jìn)入生理PH值時(shí)，表
面帶負(fù)電荷。若微載體帶正電荷，則利用靜電引力可加快細(xì)胞貼壁速度。若微載體帶負(fù)電荷，
因靜電斥力使細(xì)胞難于黏附貼壁，但培養(yǎng)液中溶有或微載體表面吸附著二價(jià)陽離子作為媒介
時(shí)，則帶負(fù)電荷的細(xì)胞也能貼附。

細(xì)胞株查詢：
ACHN    人腎癌細(xì)胞系(ACHN)
AGS    人胃腺癌細(xì)胞
AN3 CA    人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞（AN3 CA）
Ana-1    小鼠巨噬細(xì)胞
Anglne    人卵巢癌細(xì)胞系(Anglne)
AR42J    胰腺細(xì)胞AR42J
AsPC-1    人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞
B82    鼠細(xì)胞系（B82）
B95-8    絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞
BALB/3T3 clone A31    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
Bcap-37    人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37
Bel-7402    人肝癌細(xì)胞系(Bel-7402)
BEL-7404    人肝癌細(xì)胞
BEL-7405    人肝癌細(xì)胞
Bewo    人絨毛膜腫瘤細(xì)胞系(Bewo)
BGC-823    人胃腺癌細(xì)胞（低分化）
BHK-21    敘利亞倉鼠腎細(xì)胞系（BHK-21）
BI U－87    膀胱癌細(xì)胞（BI U－87）
BRL    大鼠肝細(xì)胞
BSC-1    猴腎細(xì)胞系(BSC-1)
BSG823    人胃癌BSG823
BT-474 [BT474]    人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
BT-549    人乳腺管癌細(xì)胞
BxPC-3    人原位胰腺腺癌細(xì)胞
C127    小鼠乳腺腫瘤細(xì)胞
C2C12    小鼠成肌細(xì)胞C2C12
C-33A    人子宮癌細(xì)胞C-33A
C3H/10T1/2, Clone 8    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
C6    大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞
C6/36    蚊子細(xì)胞（C6/36）
C8-D1A    鼠小腦細(xì)胞C8-D1A
Ca Ski    人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞
CA46    Burkitts淋巴瘤細(xì)胞系（CA46)
Caco-2    人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
CaES-17    人食管癌細(xì)胞CaES-17
Caki-1    人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞
Calu-3    人肺腺癌 (胸水)
Calu-6    人退行性癌細(xì)胞
Caov－3    人乳突狀卵巢腺癌細(xì)胞（Caov－3）
Caski    人宮頸上皮細(xì)胞癌（Caski）
CBRH-7919    大鼠肝癌細(xì)胞
CCD-1095Sk    人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
CCRF-CEM [CCRF CEM]    人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞
CFPAC-1    人胰腺癌細(xì)胞
CGM1    人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞
Chang liver    人張氏肝細(xì)胞
CHL    倉鼠肺細(xì)胞
CHMAS    人肥大細(xì)胞白血病細(xì)胞CHMAS
CHO/dhFr-    倉鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷
CHO-K1    倉鼠卵巢細(xì)胞亞株
CHSE    鮭魚胚胎細(xì)胞CHSE
CIK    草魚腎臟細(xì)胞(CIK)
CNE    人鼻咽癌細(xì)胞CNE（低分化）
CNE2    鼻咽癌細(xì)胞CNE2
CoC1    人卵巢癌細(xì)胞系(CoC1)
CoC1/DDP    CoC1細(xì)胞耐藥亞株(CoC1/DDP)
COLO 205    人結(jié)腸癌細(xì)胞
COLO-320    人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
COS-1    非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
COS-7    非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
CRFK    貓腎細(xì)胞
CTLA4 Ig-24    中國倉鼠卵巢細(xì)胞
CV-1 [Part of the Wistar Special Collection]    非洲綠猴腎細(xì)胞
CW-2    人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
Dami    人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
Daudi    人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
DLD-1    人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
DMS153    人小細(xì)胞肺癌DMS153
DT40    雞淋巴瘤細(xì)胞
DU 145    人前列腺癌細(xì)胞
EAC-E2G8    鼠腹水瘤（EAC-E2G8）
EBTr (NBL-4)    牛胚氣管細(xì)胞
Eca-109    人食道癌細(xì)胞Eca-109
ECV-304    人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系(ECV-304)(具有T24細(xì)胞特性)
EL-4    小鼠淋巴瘤（EL-4）
EPC    鯉魚上皮細(xì)胞EPC
ES-2    人卵巢透明細(xì)胞癌
F56    人腺癌細(xì)胞系(F56)
F81    貓腎細(xì)胞
FaDu    人咽鱗癌細(xì)胞
FG    牙鲆細(xì)胞FG

此種培養(yǎng)方式中，細(xì)胞貼附于固定的表面生長，不因?yàn)閿嚢瓒S培養(yǎng)液一起流動(dòng)，因此比較容易更換培養(yǎng)液，不需要特殊的分離細(xì)胞和培養(yǎng)液的設(shè)備，可以采用灌流培養(yǎng)獲得高細(xì)胞密度，能有效地獲得一種產(chǎn)品；但擴(kuò)大規(guī)模較難，不能直接監(jiān)控細(xì)胞的生長情況，故多用于制備用量較小、價(jià)值高的生物藥品。

CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應(yīng)器是常用的貼壁培養(yǎng)式生物反應(yīng)器，用于細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)時(shí)可使用籃式攪拌系統(tǒng)和圓盤狀載體。此載體是直徑6毫米的無紡聚酯纖維圓片，具有很高的表面積與體積比（1200cm2/g），有利于獲得高細(xì)胞密度?；@式攪拌系統(tǒng)和載體培養(yǎng)是目前貼壁細(xì)胞培養(yǎng)使用zui多的方式，除用于293細(xì)胞的培養(yǎng)外，還用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)、Hela細(xì)胞培養(yǎng)、CHO細(xì)胞培養(yǎng)及其它細(xì)胞培養(yǎng)。此種方式培養(yǎng)293細(xì)胞，細(xì)胞接種后貼壁快，接種1小時(shí)后細(xì)胞貼壁率可達(dá)98%以上，采用灌流培養(yǎng)。整個(gè)培養(yǎng)周期約7-10天，細(xì)胞增殖25-50倍。

微載體培養(yǎng)

微載體是目前*的zui有發(fā)展前途的一種動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細(xì)胞，生產(chǎn)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，如293細(xì)胞、成肌細(xì)胞、Vero細(xì)胞、CHO細(xì)胞。常用商品化微載體有三種：Cytodex?，Cytopore和Cytoline。

使用較多的反應(yīng)器有兩種：貝朗公司的BIOSTAT?B反應(yīng)器，使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統(tǒng)；NBS公司的CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應(yīng)器，使用Cell-lift雙篩網(wǎng)攪拌系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)都能實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞和收獲產(chǎn)物的有效分離。

微載體培養(yǎng)293細(xì)胞，首先要選擇合適的微載體類型和攪拌速度。接種細(xì)胞可用1L spinner微載體培養(yǎng)系統(tǒng)或是其它貼壁培養(yǎng)方式準(zhǔn)備，采用灌流培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10-15天，能達(dá)到的細(xì)胞密度為5-10×106/ml。