AGS細(xì)胞 人胃腺癌細(xì)胞
293細(xì)胞是腺病毒載體的包裝細(xì)胞。腺病毒是繼逆轉(zhuǎn)錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導(dǎo)入人體內(nèi)表達(dá)目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展；利用腺病毒載體在包裝細(xì)胞293中表達(dá)分泌性蛋白質(zhì)，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成為生產(chǎn)重組蛋白的一條途徑。因此完善293細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)具有越來越重要的市場意義。哺乳細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方式有三種：貼壁培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、無血清懸浮培養(yǎng)。這三種方式均可用于293細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)。
AGS細(xì)胞 人胃腺癌細(xì)胞 細(xì)胞特性
293細(xì)胞是用5型腺病毒75株系轉(zhuǎn)化，含有Ad5 E1區(qū)的人胚腎細(xì)胞。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建而成。293細(xì)胞是貼壁依賴型成上皮樣細(xì)胞，表現(xiàn)出典型的腺病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的表型，細(xì)胞允許Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。293細(xì)胞為人亞三倍體細(xì)胞系。293細(xì)胞在無Ca2+或含Ca2+培養(yǎng)基中可同樣生長，也可生長在血清濃度降低的培養(yǎng)基中。
轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)
轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)一般用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過渡階段，或作為生物反應(yīng)器接種細(xì)胞準(zhǔn)備的一條途徑。與傳統(tǒng)靜止單層培養(yǎng)相比，轉(zhuǎn)瓶具有三大優(yōu)點：為細(xì)胞提供較大的生長表面；輕微的轉(zhuǎn)動可以防止培養(yǎng)液中形成的某些成分對細(xì)胞生長可能產(chǎn)生的影響；細(xì)胞大部分時間僅覆蓋一薄層培養(yǎng)液，有利于氣體交換。我們已成功實現(xiàn)293細(xì)胞的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。由于293細(xì)胞對生長環(huán)境的改變較為敏感，細(xì)胞容易成團，因此維持穩(wěn)定的溫度、酸堿度和轉(zhuǎn)動速度對細(xì)胞正常均勻生長至關(guān)重要。
現(xiàn)在使用的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)包括二氧化碳培養(yǎng)箱和轉(zhuǎn)瓶機兩部分。293細(xì)胞接種后，維持適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速培養(yǎng)。不同的細(xì)胞轉(zhuǎn)速略有不同。細(xì)胞的均勻分散貼壁情況與培養(yǎng)液溫度、瓶子的轉(zhuǎn)動速度和細(xì)胞特性有關(guān)。在5-6天的培養(yǎng)周期中，細(xì)胞量可增殖20倍。
反應(yīng)器貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞株查詢：
ACHN 人腎癌細(xì)胞系(ACHN)
AGS 人胃腺癌細(xì)胞
AN3 CA 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞（AN3 CA）
Ana-1 小鼠巨噬細(xì)胞
Anglne 人卵巢癌細(xì)胞系(Anglne)
AR42J 胰腺細(xì)胞AR42J
AsPC-1 人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞
B82 鼠細(xì)胞系（B82）
B95-8 絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞
BALB/3T3 clone A31 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
Bcap-37 人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37
Bel-7402 人肝癌細(xì)胞系(Bel-7402)
BEL-7404 人肝癌細(xì)胞
BEL-7405 人肝癌細(xì)胞
Bewo 人絨毛膜腫瘤細(xì)胞系(Bewo)
BGC-823 人胃腺癌細(xì)胞（低分化）
BHK-21 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞系（BHK-21）
BI U－87 膀胱癌細(xì)胞（BI U－87）
BRL 大鼠肝細(xì)胞
BSC-1 猴腎細(xì)胞系(BSC-1)
BSG823 人胃癌BSG823
BT-474 [BT474] 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
BT-549 人乳腺管癌細(xì)胞
BxPC-3 人原位胰腺腺癌細(xì)胞
C127 小鼠乳腺腫瘤細(xì)胞
C2C12 小鼠成肌細(xì)胞C2C12
C-33A 人子宮癌細(xì)胞C-33A
C3H/10T1/2, Clone 8 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
C6 大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞
C6/36 蚊子細(xì)胞（C6/36）
C8-D1A 鼠小腦細(xì)胞C8-D1A
Ca Ski 人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞
CA46 Burkitts淋巴瘤細(xì)胞系（CA46)
Caco-2 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
CaES-17 人食管癌細(xì)胞CaES-17
Caki-1 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞
Calu-3 人肺腺癌 (胸水)
Calu-6 人退行性癌細(xì)胞
Caov－3 人乳突狀卵巢腺癌細(xì)胞（Caov－3）
Caski 人宮頸上皮細(xì)胞癌（Caski）
CBRH-7919 大鼠肝癌細(xì)胞
CCD-1095Sk 人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
CCRF-CEM [CCRF CEM] 人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞
CFPAC-1 人胰腺癌細(xì)胞
CGM1 人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞
Chang liver 人張氏肝細(xì)胞
CHL 倉鼠肺細(xì)胞
CHMAS 人肥大細(xì)胞白血病細(xì)胞CHMAS
CHO/dhFr- 倉鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷
CHO-K1 倉鼠卵巢細(xì)胞亞株
CHSE 鮭魚胚胎細(xì)胞CHSE
CIK 草魚腎臟細(xì)胞(CIK)
CNE 人鼻咽癌細(xì)胞CNE（低分化）
CNE2 鼻咽癌細(xì)胞CNE2
CoC1 人卵巢癌細(xì)胞系(CoC1)
CoC1/DDP CoC1細(xì)胞耐藥亞株(CoC1/DDP)
COLO 205 人結(jié)腸癌細(xì)胞
COLO-320 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
COS-1 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
COS-7 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
CRFK 貓腎細(xì)胞
CTLA4 Ig-24 中國倉鼠卵巢細(xì)胞
CV-1 [Part of the Wistar Special Collection] 非洲綠猴腎細(xì)胞
CW-2 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
Dami 人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
Daudi 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
DLD-1 人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
DMS153 人小細(xì)胞肺癌DMS153
DT40 雞淋巴瘤細(xì)胞
DU 145 人前列腺癌細(xì)胞
EAC-E2G8 鼠腹水瘤（EAC-E2G8）
EBTr (NBL-4) 牛胚氣管細(xì)胞
Eca-109 人食道癌細(xì)胞Eca-109
ECV-304 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系(ECV-304)(具有T24細(xì)胞特性)
EL-4 小鼠淋巴瘤（EL-4）
EPC 鯉魚上皮細(xì)胞EPC
ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌
F56 人腺癌細(xì)胞系(F56)
F81 貓腎細(xì)胞
FaDu 人咽鱗癌細(xì)胞
FG 牙鲆細(xì)胞FG
此種培養(yǎng)方式中，細(xì)胞貼附于固定的表面生長，不因為攪拌而跟隨培養(yǎng)液一起流動，因此比較容易更換培養(yǎng)液，不需要特殊的分離細(xì)胞和培養(yǎng)液的設(shè)備，可以采用灌流培養(yǎng)獲得高細(xì)胞密度，能有效地獲得一種產(chǎn)品；但擴大規(guī)模較難，不能直接監(jiān)控細(xì)胞的生長情況，故多用于制備用量較小、價值高的生物藥品。
CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應(yīng)器是常用的貼壁培養(yǎng)式生物反應(yīng)器，用于細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)時可使用籃式攪拌系統(tǒng)和圓盤狀載體。此載體是直徑6毫米的無紡聚酯纖維圓片，具有很高的表面積與體積比（1200cm2/g），有利于獲得高細(xì)胞密度。籃式攪拌系統(tǒng)和載體培養(yǎng)是目前貼壁細(xì)胞培養(yǎng)使用zui多的方式，除用于293細(xì)胞的培養(yǎng)外，還用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)、Hela細(xì)胞培養(yǎng)、CHO細(xì)胞培養(yǎng)及其它細(xì)胞培養(yǎng)。此種方式培養(yǎng)293細(xì)胞，細(xì)胞接種后貼壁快，接種1小時后細(xì)胞貼壁率可達(dá)98%以上，采用灌流培養(yǎng)。整個培養(yǎng)周期約7-10天，細(xì)胞增殖25-50倍。
微載體培養(yǎng)
微載體是目前*的zui有發(fā)展前途的一種動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點，放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細(xì)胞，生產(chǎn)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，如293細(xì)胞、成肌細(xì)胞、Vero細(xì)胞、CHO細(xì)胞。常用商品化微載體有三種：Cytodex?，Cytopore和Cytoline。
使用較多的反應(yīng)器有兩種：貝朗公司的BIOSTAT?B反應(yīng)器，使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統(tǒng)；NBS公司的CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應(yīng)器，使用Cell-lift雙篩網(wǎng)攪拌系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)都能實現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞和收獲產(chǎn)物的有效分離。
微載體培養(yǎng)293細(xì)胞，首先要選擇合適的微載體類型和攪拌速度。接種細(xì)胞可用1L spinner微載體培養(yǎng)系統(tǒng)或是其它貼壁培養(yǎng)方式準(zhǔn)備，采用灌流培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10-15天，能達(dá)到的細(xì)胞密度為5-10×106/ml。
