人胰腺腺泡上皮癌HPAC細胞 微量凱氏（Micro-Kjeldahl）定氮法測定蛋白質(zhì)含量
【實驗原理】
蛋白質(zhì)（或其它含氮有機化合物）與濃H2SO4共熱時，其中碳、氫兩種元素被氧化成CO2和H2O，而氮元素轉(zhuǎn)變成NH3，并進一步與H2SO4反應生成（NH4）2SO4，殘留于消化液中，該過程通常稱為“消化”。以甘氨酸為例：
CH2NH2COOH + 3H2SO4 → 2CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3
2NH3 + H2SO4 → （NH4）2SO4
但是，該反應進行得很緩慢，消化費時較長，通常需加入K2SO4或Na2SO4以提高反應液的沸點，并加入CuSO4作為催化劑，以加速反應的進行；氧化劑H2O2也能加速反應。消化完畢后，加入過量濃堿（如NaOH）使消化液中的（NH4）2SO4分解放出NH3，以蒸餾法借水蒸汽蒸出的NH3，用一定量、一定濃度的H3BO3溶液吸收。NH3與酸溶液中H+結(jié)合成NH4+，使溶液中的H+濃度降低，然后用標準強酸（如鹽酸）滴定，直至恢復溶液中原來的H+濃度為止。
（NH4）2SO4? +? NaOH → Na2SO4 + 2 NH4OH
NH4OH? → NH3? + ?H2O
3NH3 + H3BO3 → 3 NH4+ + BO33－
BO33－ + 3H+ → H3BO3
zui后根據(jù)所用標準酸的量計算出樣品中的含氮量。大多數(shù)蛋白質(zhì)的含氮量平均為16%，所以將測得的蛋白質(zhì)的含氮量乘以蛋白質(zhì)系數(shù)6.25（即每含氮1g，就表示該物質(zhì)含蛋白質(zhì)6.25g），即可計算出蛋白質(zhì)的含量。
人胰腺腺泡上皮癌HPAC細胞 微量凱氏（Micro-Kjeldahl）定氮法測定蛋白質(zhì)含量【器材和試劑】
（一）器材
1. 100ml凱氏燒瓶
2. 改進型凱氏定氮儀
3. 50ml容量瓶
4. 分析天平（電子天平）
5. 烘箱
6. 電爐
7. 酒精燈
8. 小玻璃珠
9. 滴定管
10. 洗瓶
11. 錐形瓶
12. 鐵架臺
13. 普通面粉或其它樣品
（二） 試劑
1. 消化液
30% H2O2∶濃H2SO4∶H2O =3∶2∶1
2. 30% NaOH溶液
3. 2% H3BO3溶液
4. 混合催化劑（粉末K2SO4- CuSO4混合物）
K2SO4與CuSO4以3∶1比例充分研細混勻。
5. ?0.01mol/L標準鹽酸溶液
6. 混合指示劑（田氏指氏劑）
取0.1%甲烯藍-無水乙醇溶液50ml、0.1%甲基紅-無水乙醇溶液200ml，混合，貯于棕色瓶中備用。該指示劑酸性時為紫紅色，堿性時為綠色，變色范圍很窄（pH5.2～5.6）且很靈敏。
7. 蒸餾水
人胰腺腺泡上皮癌HPAC細胞 微量凱氏（Micro-Kjeldahl）定氮法測定蛋白質(zhì)含量【實驗步驟】
（一） 改進凱氏定氮儀的構(gòu)造和安裝
改進型凱氏定氮儀由蒸汽發(fā)生器、反應室及冷凝器三部分組成。蒸餾裝置的結(jié)構(gòu)如圖所示，可分成三部分來敘述：
1. 蒸汽發(fā)生器和反應室：蒸汽發(fā)生器有3個開口（圖中的3、4、5）；反應室有1個開口（圖中的6）。
2. 冷凝器和通氣室：冷凝器有2個開口（圖中的9、10）；通氣室有2個開口（圖中的12、13）。
3. 排水柱： 排水柱有3個開口（圖中的15、16、17）。
安裝時，按圖的連接方式仔細安裝在一平穩(wěn)的實驗臺上。先將主體部分固定在鐵架臺上，其底部放上電爐或酒精燈。然后將5與13；4與16；12與15；6與7用橡皮管連接，并夾上自由夾。zui后長橡膠管連接進水口10和出水口17。
