傳代細(xì)胞 染色體G顯帶技術(shù)
1. 實(shí)驗(yàn)原理 人們用物理、化學(xué)因素處理后，再用染料對(duì)染色體進(jìn)行分化染色，使每條染色體上出現(xiàn)明暗相間，或深淺不同帶紋的技術(shù)稱為顯帶技術(shù)（banding technique）。染色帶的數(shù)目、部位、寬窄和著色深淺均具有相對(duì)穩(wěn)定性，所以每一條染色體都有固定的分帶模式，即稱帶型。染色體帶型是鑒別染色體的重要依據(jù)。染色體分帶技術(shù)可分為兩大類，一類是產(chǎn)生的染色帶分布在整條染色體的長度上如：G、Q和R帶；另一類是局部性的顯帶，它只能使少數(shù)特定的區(qū)域顯帶，如C、T和N帶。
染色體帶型的形成主要取決于DNA、核酸結(jié)合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的堿基組成以其與結(jié)合蛋白形成的特定結(jié)構(gòu)對(duì)染料分子的作用。Summer（1974）的實(shí)驗(yàn)表明，DNA分子的螺旋及折疊非組蛋白蛋白質(zhì)的分布在染色體上呈區(qū)域性差異，這些差異導(dǎo)致二硫鍵與硫氫鍵分布不同，深染區(qū)由許多二硫鍵交聯(lián)，因?yàn)樗着c染料結(jié)合；而淺染區(qū)則缺乏二硫鍵、多硫氫鍵，不易與染料結(jié)合而呈淺色傳代細(xì)胞 染色體G顯帶技術(shù)。此外，由于染色體內(nèi)DNA的堿基分布不同而造成DNA螺旋，折疊的程度也不同，繼而影響到結(jié)合蛋白的分布與構(gòu)型，與染料結(jié)合后呈現(xiàn)深淺不同的帶紋。
G帶即吉姆薩帶，是將處于分裂中期的細(xì)胞經(jīng)胰酶或堿、熱、尿素等處理后，再經(jīng)吉姆薩染料染色后所呈現(xiàn)的區(qū)帶，是目前被廣泛應(yīng)用的一種帶型。其特性是顯帶方法簡單恒定，帶型穩(wěn)定，保存時(shí)間長。一般認(rèn)為，易著色的陽性帶為含有AT多的染色體節(jié)段，在間期核呈固縮狀態(tài)，而且是DNA晚復(fù)制區(qū)之一，有相當(dāng)一部分中度重復(fù)序列DNA可能在G帶區(qū)；相反，含GC多的染色體段則不易著色。也有人認(rèn)為，Giemsa染料在G帶區(qū)是與DNA結(jié)合，而且與結(jié)合DNA的染色質(zhì)非組蛋白有關(guān)?？偟膩碚f，G顯帶的機(jī)制還未搞清。
2. 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 體細(xì)胞培養(yǎng)后制備的染色體標(biāo)本；淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后制備的染色體標(biāo)本。
3. 試劑與器材
傳代細(xì)胞 染色體G顯帶技術(shù)（1）用具：離心管，離心機(jī)，天平，37℃溫箱，載玻片，蓋玻片，恒溫水浴鍋，光學(xué)顯微鏡，標(biāo)本板，玻璃鉛筆，定時(shí)鐘，染色缸，直柄虹膜鑷，滴管。
（2）藥品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。
4. 實(shí)驗(yàn)步驟
（1）將制好的染色體標(biāo)本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。
（2）放入預(yù)溫至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用時(shí)間并不*相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時(shí)間。
（3）在Giemsa 染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。
（4）鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標(biāo)本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標(biāo)本，可供攝像分析
5. 注意事項(xiàng)
（1）胰蛋白酶濃度和處理時(shí)間隨氣溫高低有所不同。一般規(guī)律是標(biāo)本存放時(shí)間越長，在胰蛋白酶當(dāng)中處理時(shí)間越長。太新鮮的標(biāo)本，染色體會(huì)出現(xiàn)毛茸現(xiàn)象。片齡很長的標(biāo)本往往會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)狀的染色體。
（2）胰蛋白酶溫度：溫度越高，反應(yīng)的速度就越快，一般是室溫，但溫度必須穩(wěn)定至少20min。
（3）胰蛋白酶處理的時(shí)間：如果細(xì)胞呈紫藍(lán)色，說明胰蛋白酶的作用時(shí)間不夠，如果細(xì)胞呈桃紅色，說明作用時(shí)間剛好。
