細(xì)胞:Y-1細(xì)胞
中文名稱:小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢萠酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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Foxd3基因是干細(xì)胞多能性,即干細(xì)胞在哺乳動(dòng)物胚胎中分化為不同類型組織細(xì)胞的能力,所必需的因子。
干細(xì)胞具有巨大的疾病治療潛力,如果利用干細(xì)胞,就應(yīng)該了解它們分化能力背后的基礎(chǔ)。
在干細(xì)胞的所有調(diào)控基因中,似乎是Foxd3基因的表達(dá)起著防止干細(xì)胞迅速分化也就是發(fā)育成不同組織類型的作用,控制干細(xì)胞的分化才能使胚胎維持有足夠的干細(xì)胞保證繼續(xù)的正常發(fā)育。
為研究Foxd3基因的功能,培養(yǎng)出Foxd3基因突變失活的小鼠品系,然后對(duì)這些小鼠進(jìn)行基因分析以確定Foxd3蛋白的作用。
Foxd3缺失的胚胎不會(huì)存活很長(zhǎng)時(shí)間。雖然存在部分卵黃囊(胚外膜的一種,供應(yīng)早期胚胎發(fā)育時(shí)需要的養(yǎng)分)的形式,然而含有所有組成發(fā)育胚胎的機(jī)體的細(xì)胞的內(nèi)部細(xì)胞團(tuán)無法擴(kuò)大到足以產(chǎn)生胚胎和一些支持組織的程度。
沒有Foxd3,小鼠胚胎就無法維持足夠的干細(xì)胞幸免于發(fā)育過程中的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)Foxd3是少數(shù)幾個(gè)作為發(fā)育胚胎的‘總開關(guān)’的基因之一。