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MTT檢測(cè)細(xì)胞活性的操作方法

一、MTT 是什么
MTT 是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱為 3-(4,5)-dimethylthiahiazo
(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語(yǔ)化學(xué)名為 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基
四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。
二、MTT 法用來(lái)做什么
簡(jiǎn)單地說(shuō)：是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。
MTT 主要有兩個(gè)用途
1．藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測(cè)定；
2．細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定。
MTT檢測(cè)細(xì)胞活性的操作方法 三、為何 MTT 可以用來(lái)做上述工作
檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色
結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶
解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在 490nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT
結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值（OD 值），來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD
值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)（如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?。
 四、實(shí)驗(yàn)所需材料
1．MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的終濃度為 5mg/ml,須用 PBS 或生理鹽水做溶劑。
市面上一般 MTT 的包裝為 100mg,250mg 或 1g
1.1 對(duì)于 100mg 這樣的小包裝，廠家都是將 MTT 放入小管中的，個(gè)人建議不要再用天平稱
量分裝，而應(yīng)該一次性將其全配制成溶液，如 100mg 用 20mlPBS 來(lái)溶解。具體做法：預(yù)
先在 50ml 離心管（沒(méi)有的話，可用培養(yǎng)瓶替代）加入 20ml PBS，從中先吸取 500-1000ul
PBS 裝入含 MTT 的小管中，吹打若干次后將其移入 50ml 離心管，然后再混勻?？梢灾貜?fù)
幾次，以使小管中的 MTT 不殘留于管內(nèi)。將 MTT *混勻后，用 0.22μm 濾膜過(guò)濾以除去
溶液里的細(xì)菌，分裝避光(避光袋或是黑紙、錫箔紙包住)可長(zhǎng)期保存于-20 度。按細(xì)胞培養(yǎng)
板每孔需加 10ul 計(jì)算，一般每 96 孔板約需 1ml，所以分裝時(shí)可考慮每管分裝 1ml。
1.2 對(duì)于大包裝，可按上述方法稱取一部分溶解，也有人將粉劑分裝在 EP 管里，用的時(shí)候
現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加。
注意事項(xiàng)：
1. 在配制和保存的過(guò)程中，容器用鋁箔紙包住。
配成的 MTT 需要無(wú)菌，MTT 對(duì)菌很敏感
MTT 一般現(xiàn)用現(xiàn)配，過(guò)濾后 4 度避光保存兩周內(nèi)（個(gè)人曾做過(guò) 4 度避光保存 4 周的
MTT 溶液，效果仍然不錯(cuò)）有效，或配制成 5mg/ml 保存在-20 度長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，
小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當(dāng) MTT 變?yōu)榛揖G色時(shí)就
不能再用。
MTT 有致癌性，用的時(shí)候小心,有條件帶那種透明的簿膜手套.
2．MTT 甲瓚溶解液
2.1 二甲基亞砜 DMSO，可以直接溶解，無(wú)需配制，使用方便，溶解速度快，但對(duì)人體毒性
較大，且需去除原培養(yǎng)液，在去除培養(yǎng)液的過(guò)程中，可能會(huì)把結(jié)晶去掉，導(dǎo)致結(jié)果不穩(wěn)定。
2.2 三聯(lián)溶解液：SDS10g，異丁醇 5ml，10M HCl 0.1ml 用雙蒸水溶解配成 100ml 溶液，
該溶解液不需去除原培養(yǎng)基，但溶解較慢。
該溶解液因含有 SDS，在低溫保存的時(shí)候易產(chǎn)生結(jié)晶，因此在用之前必須提前幾小時(shí)拿至
室溫，將 SDS 結(jié)晶全部溶解后再使用。

人肺腺癌細(xì)胞 Calu-3細(xì)胞
人胚肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞 SL-1細(xì)胞
人支氣管上皮樣細(xì)胞 BEAS-2B細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞 HEL-2細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H226細(xì)胞
人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞系 AE1201細(xì)胞
人胚肺細(xì)胞系 KuMA細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞 HEL-1細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 DMS 153細(xì)胞
人肺細(xì)胞 HLF-a細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞 KMB-17細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞 2BS細(xì)胞
人胚胎肺成纖維細(xì)胞 WI-38細(xì)胞
人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞 CCC-HBE-2細(xì)胞
人胚肺成纖維細(xì)胞 CCC-HPF-1細(xì)胞
MRC-5細(xì)胞--MRC-5細(xì)胞 細(xì)胞株
人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞 細(xì)胞株
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H209細(xì)胞
人低分化肺腺癌細(xì)胞 GLC-82細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H157細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H520細(xì)胞
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株 PG-BE1細(xì)胞
人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株 PG-LH7細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 A-427細(xì)胞
人低分化肺腺癌細(xì)胞 SK-LU-1細(xì)胞
人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1975細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H2227細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H23細(xì)胞
人肺腺鱗癌細(xì)胞 NCI-H596細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H838細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 LTEP-s細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 LTEP-sm細(xì)胞
人肺鱗癌瘤株 LTEP-s細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H1703細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H2170細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H524細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞 SPC-A1細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 H125細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 H1299細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 TKB-1細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，LTEP-a-2細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，Lu-165細(xì)胞
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H460細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，SPC-A-1細(xì)胞
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，095-D細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞，SK-MES-1細(xì)胞
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H661細(xì)胞
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞，NCI-H292細(xì)胞
人肺退行性癌細(xì)胞，Calu-6細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，NCI-H1395細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H358細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，HCC827細(xì)胞
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H1688細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H1299細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞，2BS細(xì)胞
人支氣管上皮樣細(xì)胞，BEAS-2B細(xì)胞
人胚肺成纖維細(xì)胞，CCC-HPF-1細(xì)胞
人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞，CCC-HBE-2細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，Calu-3細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，DMS 153細(xì)胞
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，95-D細(xì)胞
人低分化肺腺癌細(xì)胞，GLC-82細(xì)胞
人肺細(xì)胞，HLF-a細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞，HEL-1細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞，HEL-2細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞，H1299細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞，KMB-17細(xì)胞
人胚肺細(xì)胞系，KuMA細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞，LTEP-s細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，LTEP-sm細(xì)胞
人肺鱗癌瘤株，LTEP-s細(xì)胞
人胚胎心肌組織來(lái)源，CCC-HEH-2細(xì)
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，HUV-EC-C細(xì)胞
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（人膀胱癌細(xì)胞污染），ECV-304細(xì)胞
人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞，HEH2細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，BEL-7402細(xì)胞
人胚胎腸粘膜組織來(lái)源細(xì)胞，CCC-HIE-2細(xì)胞
人正常肝細(xì)胞，L-02細(xì)胞
人胰腺癌細(xì)胞，PANC-1細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，Hep G2細(xì)胞
人結(jié)直腸癌細(xì)胞，T84細(xì)胞
人胃腺癌細(xì)胞，BGC-823細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，HuH-7細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，HCT-8細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，HT-29細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，COLO 205細(xì)胞
人十二脂腸腺癌，HuTu-80細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，HCT 116細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，LoVo細(xì)胞
人胰腺腺泡上皮癌，HPAC細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，SW620細(xì)胞
人胰腺癌細(xì)胞，AsPC-1細(xì)胞
人胃癌細(xì)胞，MKN-45細(xì)胞
人胃腺癌細(xì)胞，SGC-7901細(xì)胞
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞，CFPAC-1細(xì)胞
人食管癌細(xì)胞，EC109細(xì)胞
人食管癌細(xì)胞，NEC細(xì)胞
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞，LS 180細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌瘤株，HCT 116細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，COLO 201細(xì)胞
人結(jié)直腸癌細(xì)胞，DiFi細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，Hep-3B細(xì)胞
人肝腹水腺癌細(xì)胞，SK-HEP-1細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，HHCC細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，HB611細(xì)胞
人胃腺癌細(xì)胞，AGS細(xì)胞
人胰腺腺癌細(xì)胞，BxPC-3細(xì)胞
人結(jié)腸癌細(xì)胞，CW-2細(xì)胞
人膽囊癌細(xì)胞，GBC-SD細(xì)胞
人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞，HCCC-9810細(xì)胞
人胃癌細(xì)胞（未分化），HGC-27細(xì)胞
人食管癌細(xì)胞，JAR細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，LS 174T細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，QGY-7701細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，QGY-7703細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，SMMC-7721細(xì)胞
人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞，ACC-3細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，BEL-7404細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞，BEL-7405細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，Caco-2細(xì)胞