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通派(上海)生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第13年

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ATCC細(xì)胞
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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 PA12細(xì)胞

時(shí)間:2015/4/13閱讀:1138
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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 PA12細(xì)胞  本試劑盒采用酶聯(lián)免疫間接法原理定性檢測人血清中的人類巨細(xì)胞病毒IgG抗體(HCMV-IgG),以純化人類巨細(xì)胞病毒抗原包被酶聯(lián)板。待檢血清中的人類巨細(xì)胞病毒抗體與包被抗原反應(yīng),再與酶標(biāo)記鼠抗人IgG抗體結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。加底物TMB顯色,在酶標(biāo)儀上比色后根據(jù)吸光度(A值)判定有無人類巨細(xì)胞病毒IgG抗體的存在。
使用方法:

取出試劑盒置室溫平衡30分鐘。將20×洗滌液用蒸餾水做20倍稀釋。加樣品:將待檢血清做1:10稀釋(取100μl標(biāo)本稀釋液加入反應(yīng)板孔內(nèi),再加10μl待檢血清)混勻,同時(shí)預(yù)留陰、陽性及空白對照共5孔。
加入陰性對照3孔,陽性對照1孔,各100μl對照血清??瞻讓φ?孔空置。將反應(yīng)板輕輕震蕩使樣品混勻。溫育:用封板膜封板后,置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)30分鐘。
洗板:溫育后,將封板膜揭掉,吸干孔內(nèi)液體,用洗滌液洗板5次,每次浸泡30-60秒鐘。加酶標(biāo)工作液:每孔加入100μl酶標(biāo)工作液,空白孔除外。溫育:用封板膜封板后,置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)30分鐘。
洗板:溫育后,將封板膜揭掉,吸干孔內(nèi)液體,用洗滌液洗板5次,每次浸泡30-60秒鐘。顯色:每孔加底物A、B液各50μl,輕輕震蕩混勻,用封板膜封板后,置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)10分鐘。
終止:每孔加入終止液50μl,輕輕震蕩混勻。測定:設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm(建議雙波長450/630nm檢測),測定各孔A450值。注意:在終止反應(yīng)30分鐘內(nèi)讀數(shù)。
當(dāng)使用單波長時(shí),校準(zhǔn)空白孔,設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm,測定各孔A450值,當(dāng)使用雙波長450/630nm檢測時(shí),可以不設(shè)空白孔,測定各孔A值。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 PA12細(xì)胞  標(biāo)本采集:
適用標(biāo)本類型:血清或血漿。血清中的內(nèi)源性干擾物如血脂、膽紅素、血紅蛋白在通常情況下不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。RF因子陽性、孕婦、AFP陽性標(biāo)本不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,HAV、HCV、乙肝等相關(guān)疾病抗體陽性標(biāo)本通常情況下不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
標(biāo)本采集:
血清:用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml,注入一5ml無菌的干燥玻璃管中(或含有促凝劑),室溫放置30min,2,000rpm離心3min,吸取上層血清,轉(zhuǎn)移至一潔凈的1.5ml離心管中,密閉送檢。血清樣本中混濁或有沉淀的樣本應(yīng)先離心或過濾后取澄清的液體進(jìn)行檢測,如果未充分沉淀,懸浮的纖維蛋白可能引起假陽性。
血漿:用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml,注入一5ml無菌的含有Na2EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的玻璃管中立即輕輕顛倒玻璃管混勻5-10次以充分混勻,室溫放置30min,2,000rpm離心3min,吸取上層血漿,轉(zhuǎn)移至一潔凈的1.5ml離心管中,密閉送檢。標(biāo)本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時(shí),不影響結(jié)果。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 PA12細(xì)胞  標(biāo)準(zhǔn):
空白孔(只加顯色劑和終止液)的吸光度值應(yīng)不大于0.08.陽性對照(PC)A450值大于0.30.陰性對照平均A450值小于0.08,如果質(zhì)控是有效的,實(shí)驗(yàn)結(jié)果就是有效的。  
結(jié)果判定:
每個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果獨(dú)立使用,通過(Cut off)值判定結(jié)果。計(jì)算臨界值:Cut off (C.O) =0.10+陰性對照平均(NC)A450值(當(dāng)陰性平均A450值小于0.05時(shí),按0.05計(jì)算;當(dāng)陰性平均A450值大于或等于0.05時(shí)按實(shí)際值計(jì)算)。
陰性結(jié)果:標(biāo)本吸光度值﹤臨界值為陰性。陽性結(jié)果:標(biāo)本吸光度值≧臨界值為陽性。

試劑盒規(guī)格:
組份名稱    規(guī)格及數(shù)量(48T)    規(guī)格及數(shù)量(96T)
HCMV-Ag包被板    48孔板條    96孔板條
陽性對照    1支0.5ml    1支0.5ml
陰性對照    1支0.5ml    1支0.5ml
標(biāo)本稀釋液    1瓶6.0ml    1瓶12ml
酶標(biāo)工作液    1瓶6.0ml    1瓶12ml
濃縮洗滌液(20×)    1瓶30ml    1瓶50ml
底物A液    1瓶3.0ml    1瓶6.0ml
底物B液    1瓶3.0ml    1瓶6.0ml
終止液    1瓶3.0ml    1瓶6.0ml
自封袋    1個(gè)    1個(gè)
封板膜    3張    3張
說明書    1份    1份


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人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞
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