核糖核酸酶A是內(nèi)切核糖核酸酶，可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應(yīng)終產(chǎn)物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無輔因子及二價(jià)陽離子存在時(shí)，核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復(fù)合物(Puskas et al.1982)所抑制。

核糖核酸酶A用途

生化研究，測(cè)定核酸的結(jié)構(gòu)

RNase 保護(hù)檢測(cè)

去除非特異結(jié)合的RNA

分析RNA 序列

水解蛋白樣品中的RNA

純化DNA

此外，它具有顯著的細(xì)胞毒性，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。

1、從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。

2、確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985，Winter et al.1985)。 在此方法中，RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯(cuò)配可被RNA酶A識(shí)別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動(dòng)子的質(zhì)粒，在體外合成與野生型DNA或RNA互補(bǔ)的32p標(biāo)記RNA探針，然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火， 所產(chǎn)生的單堿基錯(cuò)配可用RNA酶A切割，通過凝膠電泳分析切割產(chǎn)物的大小即可確定錯(cuò)配的位置。在所有各種可能的單堿基錯(cuò)配中，大約50%可用此法確定。

核糖核酸酶A生產(chǎn)方法

由紅霉素產(chǎn)生的蓖的發(fā)酵液提取。

以牛胰為原料，稀硫酸勻漿后用硫酸銨分級(jí)沉淀，再經(jīng)重結(jié)晶、羧甲基纖維素柱層析得產(chǎn)品。

以牛胰為原料稀酸抽提后用硫酸銨分級(jí)沉淀，在乙醇中重結(jié)晶制取。

核糖核酸酶A化學(xué)性質(zhì)

白色結(jié)晶或凍干粉，易溶于水，pI7.8，zui適pH值7.7。穩(wěn)定性：zui穩(wěn)定 pH范圍2-4.5，冷藏凍干粉或結(jié)凍的酶液可保存數(shù)年活力不變。抑制劑有脫氧核糖核酸(競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑)、變性脫氧核糖核酸(比天然的更有效)、 0.0005 mol/L Mg2+。酶反應(yīng)：專一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯鍵的裂開，形成具有2'，3'-環(huán)磷酸衍生物寡聚核苷酸。

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