兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟詳細說明

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中文名：兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒

中文別名：兔子白介素3(IL-3)ELISA Kit

供應商：上海遠慕

規(guī)格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6個月

特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。

用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。

ELISA試劑盒種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等。

試劑盒檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。

適用范圍：僅用于科研實驗，禁用于臨床。

兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟

操作步驟：

1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 

2、酶標板置4℃，包被過夜。

3、洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 

5、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。 

6、洗板，同(4)。 

7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

8、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。 

9、洗板，同(4)。 

10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 

11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 

12、分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13、數(shù)據(jù)處理：在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

注意事項：

1、在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。

2、建議新鮮標本收集后盡早檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集標本，請將標本及時分裝后放在-20℃或- 70℃條件下保存，避免反復凍融。

3、當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。

4、洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

5、一次加樣時間控制在5分鐘內。

6、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。

7、如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

8、在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。

9、底物請避光保存。

10、不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

性能優(yōu)點：

1、、靈敏、特異的抗體；

2、穩(wěn)定的重復性和可靠性；

3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

4、適用血清，血漿，組織勻漿液，細胞培養(yǎng)上清液，尿液等等多種標本類型。

實驗原理：

采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

標本的處理：

1、細胞培養(yǎng)上清液

根據(jù)需要用試劑盒中的標準稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是稀釋5倍。

2、腦脊液

根據(jù)需要用試劑盒中的標準稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是5倍。

3、血漿

a、用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲存在零下80℃直到使用。

b、用試劑盒中的標準稀釋液126倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質影響檢測，按照說明書方法檢測。

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