葡聚糖凝膠G-75使用方法詳細介紹

上海遠慕生物詳細為您介紹葡聚糖凝膠G-75使用方法，分離技巧，化學(xué)性質(zhì)及其他咨訊，本司專業(yè)供應(yīng)不同系列的葡聚糖凝膠G產(chǎn)品，包含有：葡聚糖凝膠 G-100，葡聚糖凝膠 G-25，葡聚糖凝膠 G-150，聚糖凝膠 G-200，葡聚糖凝膠 LH-20，葡聚糖凝膠 LH-60，葡聚糖凝膠 G-10，葡聚糖凝膠 G-15，更多葡聚糖凝膠G系列請！

中文名：葡聚糖凝膠G-75

中文別名：交聯(lián)葡聚糖凝膠 G-75；交聯(lián)右旋糖酐凝膠 G-75

英文名稱：Sephadex G-75

供應(yīng)商：上海遠慕

PH：2~13

保存：RT

干顆粒直徑： 40～120 μm

床體積毫升/克干分子篩：12～15ml/g

分子量分級范圍：A.肽及球形蛋白質(zhì)：3000～80000；B葡聚糖(線性分子)：1000～50000

性狀：白色珠粒或粉末，屬親水性凝膠；性穩(wěn)定，不溶于水、弱酸和堿溶液，遇強酸能使糖甘鍵分解。

適用范圍：限于科研實驗，不作臨床。

葡聚糖凝膠G-75說明書

葡聚糖凝膠G-75化學(xué)性質(zhì)：

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹； G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同；葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度；超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜；粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速；另外，粗級也可用于批量工藝。

化學(xué)穩(wěn)定性:

葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解)；它在水，鹽溶液，有機溶劑，堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解；長期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應(yīng)避免使用。

物理穩(wěn)定性:

葡聚糖疑膠并不熔融，可以在濕態(tài)，中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃，30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)；干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化；葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。

葡聚糖凝膠G-75分離技巧:

1、分離時流速不可太快，切切不可心急，所謂欲速則不達;接餾分時可開全速，節(jié)省時間。

2、柱子盡可能長，葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。

3、餾分一定要接的細，可1/10，或1/20 個保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個保留體積，對特殊保留強的化合物，可洗脫5個保留體積。

5、鞣質(zhì)成分死吸附嚴重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果，方法很成型，有大量文獻參考。

7、醇替換出來，待用；暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗，zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用；如長期不用時，可在以上處理基礎(chǔ)上，減壓抽干，再用少量乙迷洗凈抽干，室溫充分揮散至無醚味后，60～80°C干燥后保存。

葡聚糖凝膠G-75使用方法：

1、乙醇浸泡:

在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇，濾干；

2、無鹽水浸泡:

室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹；

3、 鹽酸浸泡:

在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗至中性；

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)；

6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm 以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5: 1 即可；

7、洗脫方法:

可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；

8、在位清洗(CIP)

凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白；方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

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標簽：葡聚糖凝膠G-75，葡聚糖凝膠

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