大鼠I型膠原（ColI）Elisa試劑盒說明書

    本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

    【試劑盒名稱】
    大鼠I型膠原（ColI）定量檢測試劑盒（ELISA）

    【試劑盒用途】
    定量檢測大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原（ColI）的含量。

    【檢測原理】
    本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠I型膠原（ColI）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中大鼠I型膠原（ColI）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標(biāo)準品和樣品的OD值，計算樣本中大鼠I型膠原（ColI）含量。

    【試劑盒組成】

   
    備注：標(biāo)準品（1號→6號）濃度依次為：32、16、8、4、2、1μg/L

    【需要而未提供的試劑和器材】
    1、37℃恒溫箱
    2、標(biāo)準規(guī)格酶標(biāo)儀
    3、精密移液器及一次性吸頭
    4、蒸餾水
    5、一次性試管
    6、吸水紙

    【操作步驟】
    1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
    2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
    3、加標(biāo)準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準品孔中加入標(biāo)準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
    4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
    5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
    6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對照孔不加。
    7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
    8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
    9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。
    10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
    11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
    12、計算：根據(jù)標(biāo)準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

    大鼠I型膠原（ColI）Elisa試劑盒 【樣本要求】
    1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
    2、標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

    【注意事項】
    1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準。
    2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
    3、建議所有的標(biāo)準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
    4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
    5、本試劑盒定量范圍為1-32μg/L，超過此范圍，為標(biāo)準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（1-32μg/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
    6、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時間。
    7、為避免交叉污染，標(biāo)準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。
    8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
    9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

    【操作程序總結(jié)】
    準備試劑，樣品和標(biāo)準品
    加入準備好的樣品和標(biāo)準品，37℃反應(yīng)30分鐘
    洗板4次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
    洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
    加入終止液
    15分鐘之內(nèi)讀OD值

    計算
    【檢測范圍】
    1μg/L-32μg/L

    【規(guī)格】
    96人份/盒

     大鼠I型膠原（ColI）Elisa試劑盒 【貯藏】
    2-8℃，避光防潮保存。

    【有效期】
    6個月