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華瑞科研網(wǎng)-ELISA試劑盒
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閱讀:246發(fā)布時(shí)間:2015-01-06
華瑞科研網(wǎng)-ELISA試劑盒
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人單純皰疹病毒I型抗體IgG(HSV-1 IgG)試劑盒操作步驟
1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照 1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50%l。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40%l,然后再加待測(cè)樣品 10%l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50%l,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50%l,再加入顯色劑 B50%l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50%l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行
人單純皰疹病毒I型抗體IgG(HSV-1 IgG)試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為單純皰疹病毒 I型抗體 IgG(HSV-1
IgG)陰性
陽(yáng)性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為單純皰疹病毒 I型抗體 IgG(HSV-1 IgG)陽(yáng)性
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