污染是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問題。由每一種細(xì)胞有其*的培養(yǎng)體系，因此污染造成后果也不盡相同。某些污染的發(fā)生往往難以察覺檢測(cè)，而且污染源能長(zhǎng)期共存于培養(yǎng)體系中，這類染事實(shí)上大部分被人們忽視了。培養(yǎng)的細(xì)胞作為個(gè)生物體，會(huì)對(duì)培養(yǎng)環(huán)境以及環(huán)境中的污染物作相應(yīng)的反應(yīng)，造成培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的改變，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成潛在的威脅，而且隨著污染時(shí)間的長(zhǎng)而增加。培養(yǎng)環(huán)境中的物理、化學(xué)及生物因素都可能入培養(yǎng)環(huán)境造成污染。由于入侵的微生物在培養(yǎng)系中不斷增殖、代謝，因此生物性的污染對(duì)細(xì)胞的害zui大。隨著污染微生物的不斷增殖，交叉污染可能性也不斷增加。此外，微生物代謝消耗大量需的養(yǎng)分，同時(shí)產(chǎn)生多種有毒的代謝產(chǎn)物，如酶、抗原及毒素等，進(jìn)一步對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用。因此，識(shí)細(xì)胞培養(yǎng)污染的途徑及其危害性，建立細(xì)胞培規(guī)范的操作方法及規(guī)章制度，可以有效地防止污染保證實(shí)驗(yàn)體系的穩(wěn)定性和可靠性。

1、細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)

為了減少污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響，必須建立細(xì)胞凍存庫(kù)。細(xì)胞凍存庫(kù)應(yīng)該分主細(xì)胞庫(kù)(Master cell bank， MCB) 和工作細(xì)胞庫(kù) (Working cell bank，WCB)，當(dāng)需要做實(shí)驗(yàn)時(shí)從主細(xì)胞庫(kù)中復(fù)蘇細(xì)胞建立工作細(xì)胞庫(kù)。每一個(gè)凍存標(biāo)本都應(yīng)明確記錄細(xì)胞的性質(zhì)、代數(shù)及有無污染。同時(shí)還應(yīng)建立規(guī)范的檢測(cè)程序進(jìn)行菌檢及細(xì)胞鑒定 。

為了保證培養(yǎng)細(xì)胞系的完整性，必須進(jìn)行詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)記錄，應(yīng)包括以下內(nèi)容:細(xì)胞系的種類及來源、有無污染(如細(xì)菌，病毒，支原體) 、細(xì)胞代數(shù)和倍增時(shí)間、以及選擇性突變。詳細(xì)的記錄有利于對(duì)細(xì)胞的遺傳及生理特性在常規(guī)傳代培養(yǎng)中因突變、污染及各種原因?qū)е碌母淖冞M(jìn)行分析。經(jīng)過連續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞與它較早代數(shù)的凍存細(xì)胞相比，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞在適應(yīng)環(huán)境的過程中，其生物特性已發(fā)生了改變。培養(yǎng)的細(xì)胞由若干生長(zhǎng)速度及活力各異的亞群組成。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)生長(zhǎng)速度快及活力高的細(xì)胞亞群逐漸占優(yōu)勢(shì) 這種選擇性，趨勢(shì)會(huì)影響整個(gè)細(xì)胞群的生物特性。應(yīng)用不同代數(shù)的細(xì)胞連續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)則結(jié)果會(huì)發(fā)生偏差。建立細(xì)胞凍存庫(kù)就能避免這種影響 通過復(fù)蘇相同代數(shù)的細(xì)胞，人們就能在較為均一的條件下重復(fù)實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)工作需要清潔，保持良好的環(huán)境及規(guī)范的操作程序 。超凈工作臺(tái)是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用的無菌操作裝置，它需要合理的布置及經(jīng)常性的維護(hù)。超凈工作臺(tái)的工作原理是驅(qū)動(dòng)經(jīng)濾菌凈化后的空氣，通過工作臺(tái)面形成氣流屏障，從而阻止外界污染物的侵入并使操作過程中產(chǎn)生的飛沫限制在超凈工作臺(tái)中。因?yàn)椴僮鬟^程中可能產(chǎn)生有毒的物質(zhì)，所以采用垂直氣流比水平氣流安全。

當(dāng)進(jìn)行移液，傾倒液體的操作過程會(huì)產(chǎn)生飛沫并沉積在超凈工作臺(tái)內(nèi)物體的表面。超凈工作臺(tái)的氣流并不能阻止飛沫的產(chǎn)生，飛沫會(huì)隨著氣流的方向飄浮。超凈工作臺(tái)不合理的放置、不恰當(dāng)?shù)木S護(hù)以及不規(guī)范的使用會(huì)破壞超凈工作臺(tái)氣流的方向?qū)е嘛w沫更廣泛的沉積。酒精燈的火焰、操作者的活動(dòng)、談話、咳嗽及打噴嚏都有可能影響氣流。飛沫的沉積是導(dǎo)致超凈工作臺(tái)內(nèi)物品污染的主要因素造成潛在污染的進(jìn)一步傳播。因此為減少交叉污染的發(fā)生，應(yīng)盡可能減少超凈工作臺(tái)內(nèi)的物品。不同細(xì)胞系以及同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室不同操作者所使用的培養(yǎng)試劑一定要分開使用，如胰酶、培養(yǎng)液等。否則，一個(gè)操作者的失誤可能引起所有細(xì)胞發(fā)生污染。