外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有三種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法，實(shí)際上其基本原理都是利用不同的方法在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入，但是由于前兩者的效率低且傷害較大，所以現(xiàn)在除了對(duì)于一些特殊細(xì)胞系，一般的轉(zhuǎn)染方法都利用脂質(zhì)體。

利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和其他方法一樣，zui重要的就是防治其毒性，因此脂質(zhì)體與治理的比例，細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長(zhǎng)短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題，通過實(shí)驗(yàn)摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對(duì)于效率的提高有巨大的作用。

本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法 — 脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測(cè)外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白）。

【試劑與儀器】

1 、胎牛血清。

2 、雙抗溶液（鏈霉素 100μg+ 青霉素 100 單位）。

3 、DMEM 培養(yǎng)基。

4 、轉(zhuǎn)染試劑（ LIPOFECTAMINE 2000 ）。

5 、細(xì)胞培養(yǎng)基（ DMEM+10%NCS ）。

6 、PBS 。

7、無血清培養(yǎng)基。

8 ．胰酶（ Trypsin ）。

9 ．培養(yǎng)皿，移液管，量筒，恒溫水浴箱，離心機(jī)， 15ml 離心管，微量移液器，熒光顯微鏡和 CCD 。