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當(dāng)前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
掌握植物細(xì)胞骨架的光鏡標(biāo)本制作方法。
細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩9鈱W(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀察多用1% Triton X-100處理細(xì)胞,可使細(xì)胞膜溶解,而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)被保存, 再用考馬斯亮蘭R250染色,使得胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。
二、材料、試劑和儀器
1. 材料
新鮮洋蔥鱗莖、人口腔上皮細(xì)胞
2. 試劑
1) M緩沖液(pH 7.2)各成分終濃度為:
50mmol/L咪唑(MW:68.08),
50mmol/L KCl(MW:74.55),
0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30),
1mmol/L EGTA(MW:380.36),
0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24),
1mmol/L DTT(MW:154.3)
2) 6mmol/L PBS磷酸緩沖液 (pH 6.5):
KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (見附錄3 查磷酸緩沖液的配置)
3) 0.7% NaCl生理鹽水
4) 1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M-緩沖液
5) 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL
6) 0.2% 考馬斯亮藍(lán)R250染液 200mL:
考馬斯亮藍(lán)R250 0.2g,
甲醇 46.5mL,
冰乙酸 7mL,
蒸餾水46.5 mL
3.儀器
光學(xué)顯微鏡,鑷子,剪刀,試管,表面皿,滴管,載玻片,蓋玻片,滅菌牙簽,1.5mL離心管,1mL吸頭,1mL取液器,酒精燈,染色缸
細(xì)胞骨架動(dòng)畫
三、實(shí)驗(yàn)程序
細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察
四、結(jié)果與分析
洋蔥鱗莖外層與內(nèi)層的表皮細(xì)胞比較(放大倍數(shù)10×20)
細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察
五、思考題
1.光鏡下觀察到的細(xì)胞骨架有何形態(tài)特征?
2.請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)鑒定你所觀察到的細(xì)胞骨架是哪一類型。
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