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掌握水產(chǎn)動(dòng)物氨氮排泄率的測(cè)定方法,并通過測(cè)定魚類等水生動(dòng)物的氨氮排泄率來計(jì)算蛋白質(zhì)的代謝率。
水生生物在進(jìn)行能量代謝時(shí),消耗體內(nèi)的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)分解后大部分產(chǎn)物以氨氮形式排入水中,使水中氨氮含量增加,測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)水中氨氮含量的變化即為氨氮排泄率。
氨氮量的測(cè)定依據(jù)游離態(tài)的氨或銨離子與納氏試劑反應(yīng),生成黃棕色絡(luò)合物。該絡(luò)合物的色度與氨氮的含量呈正比,可用分光光度計(jì)測(cè)定。
[試劑與器材]
試劑:
1、0.35%的硫代硫酸鈉:稱取3.5g硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O)溶于水,稀釋至1000ml。
2、25%的氫氧化鈉溶液
3、 納氏試劑:稱取16g氫氧化鈉溶于50ml水中,冷卻至室溫。稱取7.0g碘化鉀和10.0g碘,溶于少量水中。然后將此溶液在攪拌下緩慢加入到氫氧化鈉溶液中,用水稀釋至100ml,于暗處靜置24小時(shí),傾倒出的上層清液,貯存于比色瓶中,在暗處存放。有效期可達(dá)一年。
4、50%的酒石酸鉀鈉溶液:稱取50g酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6·4H2O)溶于水中,煮沸除氨,冷卻后用水稀釋至100ml。
5、氯化氨標(biāo)準(zhǔn)貯備液:稱取經(jīng)100~110℃干燥2小時(shí)的氯化銨3.8190g溶于水,移入1000ml容量瓶中,稀釋至標(biāo)線,混合均勻。此溶液1.00ml含1.000mg氨態(tài)氮。
6、氯化銨標(biāo)準(zhǔn)溶液:吸取1.00ml氯化銨標(biāo)準(zhǔn)貯備液于1000ml容量瓶中,用水稀釋至標(biāo)線。此溶液1.00ml含0.010mg氨態(tài)氮。
器材:
水生動(dòng)物呼吸室,及其耗氧率測(cè)定裝置,分光光度計(jì),比色管(50ml),比色管架,移液管,10mm比色杯,
[實(shí)驗(yàn)步驟]
1、安裝呼吸室
2、測(cè)定實(shí)驗(yàn)開始時(shí)水中氨氮值(初氨氮量)及結(jié)束時(shí)水中氨氮值(末氨氮量),同時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)時(shí)間
3、水中氨氮測(cè)定方法
(1)取清潔水樣或預(yù)處理后的澄清水樣50ml于50ml比色管中,加入50%得酒石酸鉀鈉溶液1.0ml,混合均勻。再加入納氏試劑1.0ml,搖勻。放置10分鐘后進(jìn)行比色。
(2)在一組50ml比色管中分別加入氯化氨標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml,加水至標(biāo)線,按步驟1.顯色。
用10mm比色杯,在波長(zhǎng)420nm處以水作參比,測(cè)定水樣及標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。同時(shí)以50ml水代替水樣按與水樣*相同的操作步驟(包括預(yù)處理)進(jìn)行空白試驗(yàn),并測(cè)定其吸光度。
(3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)系列所測(cè)得的吸光度減去試劑空白(零濃度)的吸光度值,繪制吸光度對(duì)氨氮含量(μg)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(4)結(jié)果計(jì)算:
C N (mg/L) = m/V
式中m------從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的水樣氨氮含量(ug)
V------水體體積(ml)
4、氨氮排泄率的計(jì)算
[方法評(píng)估]
這是一種經(jīng)典的方法,簡(jiǎn)便、易于操作。
[應(yīng)用意義]
水產(chǎn)動(dòng)物的排泄氮主要是氨氮,通過測(cè)定水產(chǎn)動(dòng)物的排氨率,可以反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的排泄量;另外通過測(cè)定排氨率,結(jié)合食入氮、糞氮和體內(nèi)沉積氮的測(cè)定,可以研究水產(chǎn)動(dòng)物的氮收支。
[注意事項(xiàng)]
1、操作應(yīng)在無氨的環(huán)境中進(jìn)行。
2、氨氮含量大于2mg/L時(shí),水樣應(yīng)先稀釋再進(jìn)行測(cè)定。
3、樣品中含有懸浮物,余氯金屬離子硫化物和有機(jī)物等對(duì)測(cè)定有干擾,處理方法如下:
(1)含有余氯的水樣加入適量的硫代硫酸鈉溶液,每0.5ml可除去0.25mg余氯。
(2)水樣渾濁,有色或含硫化氫或易為堿沉淀的金屬離子時(shí),取100ml水樣于具塞碘量瓶中,加0.3%硫酸鋅溶液1ml和25%氫氧化鈉溶液0.1~0.2ml,使水樣pH值約為10.5,混合均勻,放置10分鐘,用濾紙過濾,棄去2~5ml初濾液后,接取濾液備用。
(3)加50%酒石酸鉀鈉溶液絡(luò)合掩蔽鈣鎂等金屬離子以消除干擾。
(4)對(duì)污染嚴(yán)重的水樣,或用凝聚沉淀及絡(luò)合掩蔽后仍渾濁帶色的水樣,應(yīng)采用蒸餾—納氏試劑分光光度法。
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