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當(dāng)前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA分離操作方案在*移去水樣層后,勻漿中的DNA存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來(lái)。在沉淀和多次洗脫后,DNA溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL試劑從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中*回收的DNA可以用來(lái)做樣品中DNA含量的測(cè)定。同時(shí)抽提的基因組DNA可以用于對(duì)Northern analysis的結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,因?yàn)榛蚪MDNA變異程度比總RNA或組織重量要小。[由于來(lái)源的不同,所得到的DNA沉淀在進(jìn)一步應(yīng)用前可能需要額外的純化步驟(例如苯酚抽提等等)。]
實(shí)驗(yàn)所需但試劑未提供的物品:
* 酒精
* 0.1 M檸檬酸鈉(用10%酒精配制)
* 75%酒精
8 mM NaOH
如無(wú)例外,以下操作均應(yīng)在15—30℃下完成。
1.DNA的沉淀
移除中間層上殘余的水樣層,用酒精從中間層和苯酚層中沉淀DNA。按zui初勻漿化時(shí)每1 ml TRIZOL加0.3 ml的無(wú)水乙醇,反復(fù)顛倒來(lái)混合樣品。然后將樣品置于15—30℃下2—3分鐘,再在2—8℃下以不超過(guò)2,000×g的離心力離心5分鐘沉淀DNA。
小心移除水樣層對(duì)抽提的DNA的質(zhì)量至關(guān)重要。
2. DNA的洗脫
移除離心后苯酚層中的上清液,如有必要,可以將其保留用于抽提蛋白。用0.1 M檸檬酸鈉(用10%酒精配制)洗滌DNA沉淀兩次。按zui初勻漿化時(shí)每1 ml TRIZOL加1 ml檸檬酸鈉溶液。每次洗滌時(shí)洗滌液要和DNA沉淀在15—30℃下作用30分鐘(期間周期性混勻)再在2—8℃下以2,000×g的離心力離心5分鐘。在兩次洗滌完成后,用75%的酒精重懸DNA沉淀(每1 ml TRIZOL加1.5—2 ml75%酒精),在15—30℃下放置10—20分鐘(期間周期性混勻)然后再在2—8℃下以2,000×g的離心力離心5分鐘。
對(duì)于較大的DNA沉淀(> 200 μg)或樣品中含有較多的非DNA物質(zhì)需要用0.1 M檸檬酸鈉(用10%酒精配制)溶液再洗滌一次。
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