①制做選擇平板LB+25 mg/l Kan。

②核對(duì)好要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒dna，在15 ml Falcon tube 和cuvette（電轉(zhuǎn)化用的石英樣品槽，兩面磨光，兩面磨砂）標(biāo)好質(zhì)粒名稱。將Falcon tube、cuvette、質(zhì)粒DNA、SOC培養(yǎng)基按順序?qū)?yīng)置于冰上預(yù)冷或解凍。轉(zhuǎn)化前將大腸桿菌（45 µl aliquot of E. coli DH10B Cells）置于冰上解凍（約3-5 min）。

一、將冰桶移置超凈工作臺(tái)上，取200-1000 µl、20-100 µl、0.5-10 µl 移液器（Fubbouoette）到超凈工作臺(tái)上。先用0.5-10 µl移液器取0.5-2 µl質(zhì)粒DNA到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，再用調(diào)節(jié)到50 µl 的（20-100 µl移液器）上下吹吸數(shù)次。在冰上放置2 min。

二、用調(diào)節(jié)到50 µl 的（20-100 µl移液器）將質(zhì)粒DNA和大腸桿菌細(xì)胞混合液轉(zhuǎn)移到電轉(zhuǎn)化石英樣品槽底凹槽的中央，在桌面上輕擊數(shù)次使之分散。在冰上放置1-2 min。

三、先用紙將樣品槽擦拭一下，移到2.5 kV電脈沖發(fā)生器上，同時(shí)用1000 µl移液器吸好SOC培養(yǎng)基，約4.5-5 sec后鳴叫聲停后，立即加入樣品槽內(nèi)（吹吸一次或不吹吸）。

四、將細(xì)胞懸浮液從樣品槽中取出并加入15 ml Falcon tube，在37℃，200/min振蕩培養(yǎng)1 h。在樣品槽中加滿自來(lái)水，以便清洗。

五、在此期間，可制做選擇平板LB+25 mg/l Kan。

六、將培養(yǎng)后的轉(zhuǎn)化大腸桿菌懸液在超凈工作臺(tái)上全部倒入1.5 ml微量離心管，13000 rpm離心30 s（或到達(dá)13000 rpm后離心15 s）。用1000 µl移液器取出大部分的上清，再用50 µl移液器全部棄掉剩余的上清，之后吸取100 µl lb培養(yǎng)基重新懸浮沉淀，上下吹吸數(shù)次到均勻。

七、對(duì)三角鐵焚燒滅菌，標(biāo)記選擇平板，取30 µl LB培養(yǎng)基加入平板中心，再取重新懸浮后的轉(zhuǎn)化大腸桿菌30 µl加入平板中心。待三角鐵冷卻后，在平板上研磨，至無(wú)可見(jiàn)液體為止。注意三角鐵一定要冷卻，或先在無(wú)菌液的平板上研磨加速冷卻。

八、將選擇平板在37℃下培養(yǎng)，1天后觀察轉(zhuǎn)化效果。

九、清洗電轉(zhuǎn)化樣品槽。先用自來(lái)水吸瓶沖洗十多次，之后加入酒精，放置1 h，之后用蒸餾水沖洗數(shù)次，甩干后，水平放置在濾紙上晾干。