目的和要求

1 學(xué)習(xí)和掌握用苯酚法及鹽溶液法從動(dòng)物組織提取核酸的原理及操作技術(shù)。
2 練習(xí)從動(dòng)物組織提取RNA，并鑒定純度。

實(shí)驗(yàn)原理

利用苯酚法可以直接從動(dòng)物組織中提取RNA，組織勻漿用苯酚處理并離心后，RNA即溶于上層被酚飽和的水層中，DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中，向水層加入乙醇后RNA即呈白色絮狀沉淀析出。

操作步驟

1 稱取3克肝組織，剪成小塊，置于研缽中，加3-4滴90%的苯酚溶液后研磨，勻漿中加入15mL水，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中，加10mL酚至三角燒瓶中。

2 室溫下劇烈振蕩45分鐘，于3000rpm離心20分鐘。

3 用吸管將上層液吸出，并加入1/2體積的氯仿-異戊醇，于低溫下振蕩20分鐘，以除去提取液中的蛋白質(zhì)，以2000rpm離心10分鐘，吸出上層清液，向上清液中加入醋酸鉀粉末，使zui后濃度大約為2%，裝入小燒杯后，一邊攪拌，一邊緩慢加入兩倍于上清液體積的95%乙醇以沉淀RNA。

4 于冰浴中放置半小時(shí)后，以1000rpm離心5分鐘，沉淀再用少量75%乙醇洗滌1-2次，收集沉淀，置于干燥器內(nèi)干燥，稱重。

5 測定A260/A280的值，應(yīng)大于1.85，若小于1.85，則說明含雜蛋白和DNA高了。