一. 目的
學(xué)習(xí)用濃鹽法從酵母中提取RNA
掌握用等電點(diǎn)法沉淀RNA
觀察核酸的顏色反應(yīng)，了解核酸定性與定量測定的原理
熟練掌握普通離心機(jī)的使用方法
二. 原理
酵母繁殖快，生長周期短；其細(xì)胞質(zhì)中的核酸大部分是RNA，而DNA很少；RNA提取液與菌體分離比較容易。因此，酵母是提取RNA的好材料。
將RNA從細(xì)胞中釋放出來在工業(yè)上主要有三種方法—稀堿法、濃鹽法和自溶法。本實(shí)驗(yàn)采用濃鹽法，即利用高濃度的鹽（10% NaCl）在90～100°C條件下改變了細(xì)胞膜通透性，并將核蛋白體解離成RNA和蛋白質(zhì)而使RNA釋放到鹽溶液中。同時，90～100°C的高溫可破壞磷酸單酯酶和磷酸二酯酶的活力，避免RNA的降解。注意，在30～70°C時這兩種酯酶的作用活躍，提取時應(yīng)避免在此溫度范圍內(nèi)停留時間過長。由于核膜內(nèi)的DNA分子量較大，穿越膜孔較困難，一般不易釋放到菌體外面，所以采用離心技術(shù)，可使RNA溶液與菌體殘?jiān)约癉NA分離。
根據(jù)核酸在等電點(diǎn)溶解度zui小的性質(zhì)，將溶液在低溫下調(diào)pH至2.0～2.5，RNA以白色絮狀沉淀形式從鹽溶液中析出。再次離心，固液分離，便可獲得RNA粗產(chǎn)品。
zui后用乙醇洗滌沉淀，溶解和去除脂溶性雜質(zhì)和色素以及鹽分雜質(zhì)。由于RNA不溶于乙醇，所以用乙醇洗滌還可以使RNA沉淀物脫水，變得疏松，便于干燥，提高了RNA產(chǎn)品的純度。

DNA和RNA的鑒別，較常用的方法是利用兩類核酸中不同的戊糖各自具備的不同的顏色反應(yīng)，而得以定性鑒別。其中鑒定DNA的方法稱為二苯胺法，鑒定RNA的方法稱為地衣酚（苔黑酚，3,5-二羥甲苯）法。具體反應(yīng)式如下：

三. 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
1. 材料
干酵母
2. 儀器
離心機(jī) 電子天平 沸水浴 烘箱 抽濾裝置 冰浴
3. 器材
普通試管： 20mL×4（干燥）
錐 形 瓶： 100mL×1
量 筒： 50mL×1
移 液 管： 1mL×2
燒 杯： 250mL×1 100mL×1 50mL×1
離 心 管： 100mL×1
溫 度 計(jì)： 50℃×1
表 面 皿： f9cm
滴 管： 2
洗 耳 球： 2
加 樣 器
pH試紙： pH0.5～5.0
濾 紙： f7cm
洗瓶、試管架、移液管架、試管夾、玻棒：各1