1 原理 　　

RT—PCR是一種將cDNA合成與PCR技術(shù)結(jié)合分析基因表達的快速靈敏的方法，主要用于對表達信息進行檢測或定量分析,還可以用來檢測基因表達差異而不必構(gòu)建cDNA文庫克隆cDNA。

RT-PCR的模板可以為總RNA或poly(A)+選擇性RNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可以使用逆轉(zhuǎn)錄酶，以隨機引物、oligo(dT)或基因特異性的引物（GSP）起始。
在實際應(yīng)用中，RT—PCR又常常分為一步法RT—PCR和兩步法RT—PCR。 2 實驗流程3 特點
　　一步法RT—PCR反應(yīng)更加快速、靈敏，操作簡便，污染率低，RNA二級結(jié)構(gòu)減少，并且因為聚合酶有校正活性，從而降低了PCR反應(yīng)的錯配率。而在兩步法中，反應(yīng)的度高，人為的誤差相對較小，并且由于在*步中將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，從而更易于保存。另外，兩步法的整個過程比一步法更節(jié)省費用。傳統(tǒng)檢測方法的樣品用量一般在ug級，而在RT—pcr檢測系統(tǒng)中樣品用量陡降至pg級。這就在很大程度上降低了實驗操作的難度，特別是mRNA樣品制備的過程得以簡化。
4 應(yīng)用
　　對基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行定性與定量的檢測，相對傳統(tǒng)的檢測方法，如Northern雜交、斑點雜交（ RNA dot）等而言，RT—PCR的度更高，且樣品用量顯著減少。利用RT—PCR對難檢測的基因進行相應(yīng)的檢測與研究更易獲得成功。另外，還能同時分析多個差別基因的轉(zhuǎn)錄。在植物方面，RT—PCR常常用于研究環(huán)境脅迫對植物基因表達的影響，以及在特定的環(huán)境或生長階段中植物體不同部位基因表達的差異性。　　對基因轉(zhuǎn)錄中剪切與拼接的檢測：如果RT—PCR引物確定了mRNA片段，根據(jù)其是否包含某個外顯子，將產(chǎn)生兩種差別DNA片段，進而在凝膠電泳圖譜上顯示出遷移率不同的條帶。因為轉(zhuǎn)座子涉及到特定的DNA序列及轉(zhuǎn)座酶識別位點，用RT—PCR方法可以較地研究轉(zhuǎn)座過程的分子機制。