ELISA試劑盒研發(fā)功用研討

2017-01-10 08:41:07上?？婆d商貿(mào)有限公司點(diǎn)擊量：335

ELISA試劑盒在優(yōu)化免疫學(xué)反響條件后，建立了克百威直接競(jìng)賽ELISA法和直接競(jìng)賽ELISA法，檢查限分別為0.005mg／L和0.01mg／L，檢查線性范圍分別為0.005～10mg／L和0.01～10mg／L，并在此根底上研發(fā)了兩種用于檢查水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒，其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好，批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0％，試劑盒檢查的正確度高， ELISA試劑盒除嘔吐物樣品外，其余樣品的回收率均在89.62％以上。
本研究ELISA試劑盒以2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為根底組成了克百威的兩種半抗原，6—[[（2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧）羰基]氨基]已酸（BFNH）和4—[[（2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧）羰基]氨基]丁酸（BFNB）。用組成的克百威免疫原免疫兔子后取得價(jià)、高特異性的抗克百威多克隆抗血清，用直接ELISA測(cè)定效價(jià)為1：16000～1：128000，純化抗體效價(jià)為1：500000～1：4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體，一起了測(cè)定了酶標(biāo)抗體的活性，效價(jià)為1：4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的穿插反響率6.19％，與呋喃酚的穿插反響率為4.00％，與供試的其它5種氨基甲酸酯類的穿插反響率均小于0.44％，對(duì)于三種有機(jī)磷的穿插反響率均低于0.12％。
ELISA試劑盒一起，依據(jù)抗體抗原的特異性反響的原理，進(jìn)一步研究了抗克百威抗體對(duì)小鼠克百威中毒后的解毒效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗體能夠較好地減輕克百威對(duì)乙酰*酯酶克制效果的表現(xiàn)，使中毒小鼠逐步恢復(fù)正常。一起將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶聯(lián)組成克百威免疫原和包被抗原，并用紫外光譜法測(cè)定克百威與載體蛋白物比。

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